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                    庄盟生物

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                    纯化回收

                    发布者:庄盟生物发布时间:2015-04-01浏览次数:2365次
                    ■纯化回收简介

                    采用硅基质材料在高盐条件下特异地与DNA结合,从而去除杂质。在低盐条件下洗脱DNA得到高纯度DNA。本公司所使用的硅基质吸附材料及玻璃奶吸附材料,能够有效的去除蛋白、盐类及有机物质。


                    凝胶回收常见问题分析
                    未回收或回收率低
                      1. 胶块未全部溶解:溶解凝胶时应置于55℃水浴,期间上下颠倒混匀数次,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。
                      2. 胶块太大(>400 mg):如果需要处理的胶块太大,应先将其切成小块,然后分两次回收。
                      3. 电泳缓冲液pH值太高:硅胶膜在高盐及低pH值(pH≤7.5)时可结合DNA,在低盐及高pH值(pH≥8)条件下洗脱。如果电泳缓冲液pH值太高,会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入3M乙酸钠(pH 5.0)10μl,将pH值调至7.5以下。
                      4. 漂洗液中未加无水乙醇:第一次使用前应在漂洗液中加入无水乙醇。漂洗液每次用后应拧紧瓶盖,以免乙醇挥发,降低回收率。
                      5. 洗脱缓冲液不合适:DNA只在低盐溶液中才能被洗脱,如试剂盒中的洗脱缓冲液TE (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。洗脱效率还与pH值有关。最大洗脱效率在pH 7.08.5间。当用水洗脱时请确保其pH值在此范围内。
                      6. 洗脱缓冲液未加在离心柱中间,尤其使用较少量洗脱缓冲液时:应滴加在离心柱正中间,并放置12分钟,再离心。


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